一、RSV動物模型構建實驗動物選擇
1. 常用動物及特點
| 動物模型 | 優點 | 缺點 | 適用研究 |
|---|---|---|---|
| BALB/c小鼠 | 成本低、易操作、免疫應答明確 | 需高劑量感染，病變較輕 | 免疫機制、疫苗評價 |
| C57BL/6小鼠 | Th1型免疫反應強 | 對RSV敏感性較低 | 免疫調節研究 |
| 棉鼠（Cotton Rat） | 高度敏感，可模擬人類病理 | 商業來源有限 | 疫苗保護效果 |
| 雪貂（Ferret） | 呼吸道生理接近人類 | 成本高、飼養復雜 | 傳播模型 |
| 非人靈長類（如獼猴） | 接近人類免疫系統 | 昂貴、倫理限制 | 臨床前研究 |
2. 選擇依據
研究目的：
免疫機制 → BALB/c小鼠（Th2偏向）
藥物/疫苗評價 → 棉鼠（病變明顯）
傳播研究 → 雪貂
病毒株適應性：人RSV（如A2株）在小鼠中需高劑量感染，而牛RSV（BRSV）在牛模型中更易致病。
二、RSV動物模型構建病毒株準備
1. 常用RSV毒株
人RSV-A（如A2、Long株）
人RSV-B（如B1、18537株）
牛RSV（BRSV）（用于牛或棉鼠模型）
2. 病毒擴增與滴定
細胞培養：
使用 HEp-2 或 Vero 細胞擴增RSV；
37℃培養，觀察CPE（細胞病變效應）。
病毒純化：超速離心去除細胞碎片。
病毒滴度測定：
噬斑試驗（Plaque Assay, PFU/mL）
TCID??（組織培養感染劑量）
三、感染途徑與劑量
1. 感染方式
| 途徑 | 方法 | 適用模型 | 特點 |
|---|---|---|---|
| 鼻腔接種 | 麻醉后滴鼻（小鼠50μL） | 小鼠、棉鼠 | 模擬自然感染 |
| 氣管內接種 | 手術或微創插管 | 棉鼠、雪貂 | 直接下呼吸道感染 |
| 氣溶膠暴露 | 霧化吸入 | 雪貂、靈長類 | 模擬空氣傳播 |
2. 感染劑量
小鼠：10?–10? PFU（BALB/c需較高劑量）
棉鼠：10?–10? PFU
雪貂：10? PFU
四、模型評估指標
1. 臨床癥狀
體重下降（>15%需考慮安樂si）
呼吸頻率增加、弓背、豎毛
雪貂：咳嗽、鼻分泌物增多
2. 病毒學檢測
肺組織病毒載量（qPCR檢測RSV-N或-F基因）
鼻洗液/支氣管肺泡灌洗液（BALF）病毒滴度（噬斑試驗）
3. 病理學分析
肺組織HE染色：
炎癥細胞浸潤（中性粒細胞、淋巴細胞）
肺泡壁增厚、支氣管上皮損傷
免疫組化：檢測RSV抗原分布
4. 免疫應答分析
體液免疫：ELISA檢測RSV特異性IgG/IgA
細胞免疫：
流式檢測CD4?/CD8? T細胞
細胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-13）
五、注意事項
1. 生物安全
RSV需在 BSL-2 實驗室操作。
雪貂模型需防止交叉感染（RSV可通過接觸/氣溶膠傳播）。
2. 動物福利
設置 人道終點（如體重下降>20%、嚴重呼吸困難）。
麻醉優化（異fu烷優于yi醚，減少刺激）。
3. 對照設置
陰性對照：PBS或未感染組
陽性對照：已知致病株（如RSV-A2）
六、常見問題與優化
1. 小鼠模型病變較輕
解決方案：
使用 BALB/c 而非C57BL/6（更敏感）
提高感染劑量（10? PFU）
聯合 poly(I:C) 或 LPS 增強炎癥
2. 免疫病理增強（疫苗增強性疾病）
現象：某些RSV疫苗（如FI-RSV）可導致Th2型免疫病理。
檢測指標：
肺嗜酸性粒細胞浸潤
IL-5、IL-13水平升高
3. 傳播模型構建困難
雪貂共飼養實驗：感染與未感染動物混合飼養，監測接觸傳播。
